Aspetti citologici, citofluorimetrici e molecolari dell'infiltrato linfoide intratiroideo in citologia aspirativa per ago sottile.

.INTRODUZIONE: L'infiltrato linfoide intratiroideo (TLI) nella tiroidite di Hashimoto (HT) rappresenta il substrato su cui può insorgere un linfoma tiroideo (TL). La citologia aspirativa per ago sottile (FNC) è uno strumento elettivo per diagnosticare e studiare la HT poiché non vi sono, per questa patologia, non ha generalmente indicazioni chirurgiche per fini diagnostici o terapeutici. Scopo del nostro studio è stato classificare il TLI nella HT comparando gli aspetti citologici ed i dati citofluorimetrici (FC) e valutando il rapporto κ/λ delle catene leggere ed il loro assetto molecolare.MATERIALI E METODI: FNC è sono stati eseguiti su 34 pazienti con HT che lamentavano ingrandimento palpabile, diffuso o nodulare, della tiroide. Due o tre prelievi sono stati eseguiti ed utilizzati per preparare strisci tradizionali, FC e sospensioni cellulari in RNAlaterTM per determinazioni molecolari. FC è stata eseguita utilizzando i seguenti anticorpi fluoresceinati: CD3, CD5, CD10, CD19, catene leggere κ e λ. In quattro casi, dalle cellule aspirate e sospese in RNAlaterTM, DNA ad alto peso molecolare è stato estratto e processato mediante Polymerase Chain Reaction (PCR) per amplificare le sequenze genomiche codificanti per la regione variabile (VDJ) delle catene pesanti. Un analisi statistica è stata infine eseguita per valutare possibili associazioni tra presentazione clinico-ecografica, pattern citologico e fenotipo del TLI. L'espressione delle catene leggere è stata valutata come percentuale delle cellule esprimenti le singole catene (≤20%, >20%) e come rapporto κ/λ.RISULTATI: I casi studiati sono stati classificati citologicamente come “lymphocytic”, “lymph-node like” e “mixed”. FC ha evidenziato linfociti T (CD3+,CD5+) in tutti i casi e linfociti B (CD19+,CD10+/-) in 22 casi. Le catene leggere sono risultate espresse in 30 casi; in 13 casi in meno del 20% delle cellule ed in 17 casi in più del 20%. Cinque casi mistrarono piccoli sbilanciamenti del rapporto κ/λ e la PCR ha mostrato diffuse bande nel gel e curve gaussiane all' heteroduplex. L'analisi statistica mostrò associazioni significative tra pattern “lymphocytic” e fenotipo T e tra “lymph-node like” pattern e fenotipo B. Una associazione statisticamente significativa è stata osservata tra restrizione per le catene leggere e bassa espressione delle catene stesse (P<0.005).CONCLUSIONI: Il pattern citologico del TLI nella HT è rappresentativo della presentazione clinica e del fenotipo cellulare prevalente. Piccoli sbilanciamenti delle catene leggere non sono supportati da riarrangiamenti genetici delle catene pesanti. FNA associato alla tipizzazione citofluorimetrica può contribuire allo studio e alla diagnosi differenziale tra TLI florida e TL.