FIK7, un nuovo "partner" proteico per il fattore di trascrizione neurospecifico mKLF7.

mKLF 7 é un fattore di trascrizione murino appartenente alla famiglia "Kruppel like", proteine con sequenza omologa al prodotto proteico del gene "Kruppel" di Drosophila. Esperimenti di ibridazione in situ hanno mostrato che mKLF 7 presenta un caratteristico profilo di espressione durante l'embriogenesi, che segue quello del gene neurospecifico Neuro D. In particolare, il profilo di espressione di mKLF 7 sembra coinvolgere questo fattore di trascrizione nella regolazione della differenziazione dei nuroblasti e della funzionalità dei neuroni mediante il mantenimento di un fenotipo post-mitotico. In questo progetto di ricerca l'obiettivo era quello di isolare un nuovo/i "partner" proteico per mKLF 7 che fosse coinvolto nella regolazione del suo ruolo di fattore di trascrizione neurospecico. A tale scopo é stata analizzata una libreria di espressione preparata da mRNA neuronale mediante il sistema del doppio ibrido nel lievito. Da questa analisi é stato isolato l'amminoterminale di una nuova proteina. Un frammento più esteso dell'amminoterminale é stato isolato mediante l'analisi di una libreria fagica di cDNA embrionale, mentre mediante l'analisi di una banca dati EST murina é stato isolata la restante porzione carbossiterminale. Per la presenza all'amminoterminale di un dominio proteico altamente conservato chiamato F-box, questa nuova proteina é stata chiamata FIK7, proteina F-box Interagente con mKLF 7. Le proteine F-box sono una famiglia di recettori solubili che reclutano substrati fosforilati al complesso proteico Ubiquitina-Ligasi. In questo lavoro é stato caratterizzato il profilo di espessione di FIK7 mediante esperimenti di Northern Blot ed inbridazione in situ. FIK7 é una proteina particolarmlente espressa in linee cellulari poco differenziate ed altamente proliferanti come le cellule delle cripte a livello intestinale e gli spermatogoni a livello dei tubuli seminiferi. Inoltre, esperimenti di "pull down" e co-immunoprecipitazione nelle cellule, realizzati con diversi mutanti di delezione dell'amminoterminale di FIK7 hanno dimostrato che i dominii proteici compresi tra gli aminoacidi 1-99 e 150-350 sono direttamente coinvolti nell'interazione con mKLF 7. I dati biochimici di interazione proteica con mKLF 7 insieme con il classico profilo di espressione di FIK7 suggeriscono fortemente la possibilità di un ruolo per questa proteina F-box di coregolatore negativo per mKLF 7. Questa ipotesi é avvalorata dalla presenza nella sequenza proteica di mKLF 7 di un dominio P.E.S.T., un segnale proteolitico condizionale che implica il coinvolgimento della via degradativa ubiquitino-dipendente. Questa via, quindi, potrebbe risultare uno dei sistemi di regolazione più importanti della attività trascrizionale di mKLF 7, che garantirebbe l'uscita delle cellule dalla fase G1 e/o il mantenimento di un fenotipo indifferenziato sia durante lo sviluppo del SNC e del SNP che durante la vita adulta.