Studio del miRNome e caratterizzazione funzionale del LDLR per l’identificazione di nuove cause molecolari dell’ipercolesterolemia familiare [miRNome study and functional characterization of LDLR for the identification of new molecular causes of Familial Hypercholesterolemia]

Premesse. L’ Ipercolesterolemia Familiare (FH) è una dislipidemia grave caratterizzata da livelli elevati di LDL , che portano ad aterosclerosi precoce. FH è una malattia monogenica causata da mutazioni di LDLR, APOB o PCSK9; in circa il 20% dei pazienti non è stata identificata la causa genetica. Obiettivi. Al fine di identificare ulteriori meccanismi patogenetici, ci si propone di caratterizzare LDLR e di studiare il miRNome di pazienti senza mutazioni nei geni tradizionalmente associati. Obiettivo 1: caratterizzazione funzionale ed espressione di LDLR. Obiettivo 2: identificazione delle alterazioni di miRNA. Metodi. 20 pazienti senza mutazioni nei geni LDLR, APOB e PCSK9 sono stati caratterizzati per analizzare l’attività funzionale e l’espressione (mRNA e proteina) di LDLR nelle cellule, utilizzando LDL o un anticorpo fluorescente. L’analisi del miRNome è stata condotta su sequenze Small RNA seguite da mappatura di miRNA verso un database miRNA; sono stati confrontati i dati dei pazienti con quelli di 10 controlli. Risultati. La caratterizzazione di LDLR ha permesso di osservare pazienti con: 1. attività normale di LDLR; 2. diminuzione dell’attività con diminuzione dell’espressione di LDLR; 3. diminuzione dell’attività con espressione normale di LDLR. Il sequenziamento di miRNA ha identificato 1784 miRNAs; 198 miRNA sono espressi in modo diverso tra i pazienti e i controlli, 30 regolati e 168 ridotti. Conclusioni. Una funzione difettosa di LDLR è stata osservata per la prima volta nei pazienti FH senza mutazioni causali, spiegando lo sviluppo del fenotipo. Sono stati identificati un gran numero di miRNA diversamente espressi, suggerendo un ruolo rilevante di queste molecole nello sviluppo di FH.