Il locus della caseina as1 (CSN1S1) di capra si caratterizza per almeno 15 alleli associati a diversi livelli di sintesi (da 3,5 a 0,0 g/l per allele). Attualmente sono noti gran parte degli eventi molecolari che li caratterizzano.In particolare la delezione di una C al 23° nt del 9° esone caratterizzerebbe l’allele CSN1S1N associato ad un contenuto apparentemente nullo di caseina as1 (EMBL n°AJ504711) mentre l’associazione di tale mutazione con due inserzioni di 11 e 3 bp nel 9° introne è responsabile dell’allele F associato ad un contenuto ridotto (~0,45g/l) (EMBL n°X56462). L’obiettivo del presente lavoro è stato quello di evidenziare mutazioni nella regione al 5’ degli alleli N e F eventualmente implicate nella regolazione del gene. Il DNA genomico è stato estratto dai leucociti ottenuti da campioni di sangue di tre capre con genotipo CSN1S1FF, NN e AA, quest’ultimo scelto quale riferimento positivo. Mediante PCR è stata amplificata e in seguito sequenziata la regione al 5’ del gene, utilizzando primer disegnati sulla sequenza caprina (EMBL n°AJ504710) e bovina (EMBL n°X59856). La regione al 5’ del gene CSN1S1 di capra (1976 nt a monte del 1° esone) contiene almeno una TATA Box correttamente posizionata, un sito Cap, un fattore di crescita GATA, una Milk Box (CTCCTCAGAATTTCTT, da -157 a -142), un sito per il recettore del progesterone (PR, da -132 a -126) e per un fattore specifico della ghiandola mammaria (MPBF, GAATTCTTAGAATT, da -101 a -88) che, a sua volta, contiene una sequenza consenso GAS (TTCNNNGAA, sito di attivazione dell’interferone gamma).Tra i nt -64/-43 si localizza un’ampia sequenza (GAAACCACARAATTAGCATNTT), in generale ben conservata nei geni delle caseine calcio sensibili, che rappresenta il sito di elementi regolatori in cis: Simian virus 40 (SV40)-type enhancer, Nuclear Factor Octamer-1 (NF Oct-1) e YYI common factor, quest’ultimo elemento necessario per una corretta trascrizione. Sono altresì individuabili diversi altri siti di legame dei fattori YY1 e NF Oct-1, così come almeno due di pregnancy-specific mammary nuclear factor (PMF) (da +8 a +16 e da -1146 a -1135) e due dell’Activator Protein (AP-1) (da -855 a -849 e da -181 a -175). Il confronto della sequenze degli alleli CSN1S1A, F e N ha messo in evidenza un totale di 25 siti variabili (singole sostituzioni/delezioni nt) delle quali 21 sembrerebbero specifiche dell’allele F e una sola dell’allele N. CONCLUSIONI - I nostri risultati indicano che nessuna delle mutazioni che caratterizzano l’allele F sembrerebbero alterare i siti di regolazione genica, mentre ulteriori indagini si rendono necessarie per valutare il ruolo della mutazione specifica dell’allele N sull’apparente assenza di sintesi proteica ad esso associata.
Analisi della regione al 5’ del gene della caseina as1 di capra / Illario, R; Cosenza, Gianfranco; Riccio, R; DI ROSA, F. P.; Gallo, Daniela; Pauciullo, A; Ramunno, L.. - (2003), pp. 292-292. (Intervento presentato al convegno Giornate Scientifiche del Polo delle Scienze e delle Tecnologie per la Vita tenutosi a Napoli nel Dal 5 al 6 Giugno 2003).
Analisi della regione al 5’ del gene della caseina as1 di capra.
COSENZA, GIANFRANCO;GALLO, DANIELA;
2003
Abstract
Il locus della caseina as1 (CSN1S1) di capra si caratterizza per almeno 15 alleli associati a diversi livelli di sintesi (da 3,5 a 0,0 g/l per allele). Attualmente sono noti gran parte degli eventi molecolari che li caratterizzano.In particolare la delezione di una C al 23° nt del 9° esone caratterizzerebbe l’allele CSN1S1N associato ad un contenuto apparentemente nullo di caseina as1 (EMBL n°AJ504711) mentre l’associazione di tale mutazione con due inserzioni di 11 e 3 bp nel 9° introne è responsabile dell’allele F associato ad un contenuto ridotto (~0,45g/l) (EMBL n°X56462). L’obiettivo del presente lavoro è stato quello di evidenziare mutazioni nella regione al 5’ degli alleli N e F eventualmente implicate nella regolazione del gene. Il DNA genomico è stato estratto dai leucociti ottenuti da campioni di sangue di tre capre con genotipo CSN1S1FF, NN e AA, quest’ultimo scelto quale riferimento positivo. Mediante PCR è stata amplificata e in seguito sequenziata la regione al 5’ del gene, utilizzando primer disegnati sulla sequenza caprina (EMBL n°AJ504710) e bovina (EMBL n°X59856). La regione al 5’ del gene CSN1S1 di capra (1976 nt a monte del 1° esone) contiene almeno una TATA Box correttamente posizionata, un sito Cap, un fattore di crescita GATA, una Milk Box (CTCCTCAGAATTTCTT, da -157 a -142), un sito per il recettore del progesterone (PR, da -132 a -126) e per un fattore specifico della ghiandola mammaria (MPBF, GAATTCTTAGAATT, da -101 a -88) che, a sua volta, contiene una sequenza consenso GAS (TTCNNNGAA, sito di attivazione dell’interferone gamma).Tra i nt -64/-43 si localizza un’ampia sequenza (GAAACCACARAATTAGCATNTT), in generale ben conservata nei geni delle caseine calcio sensibili, che rappresenta il sito di elementi regolatori in cis: Simian virus 40 (SV40)-type enhancer, Nuclear Factor Octamer-1 (NF Oct-1) e YYI common factor, quest’ultimo elemento necessario per una corretta trascrizione. Sono altresì individuabili diversi altri siti di legame dei fattori YY1 e NF Oct-1, così come almeno due di pregnancy-specific mammary nuclear factor (PMF) (da +8 a +16 e da -1146 a -1135) e due dell’Activator Protein (AP-1) (da -855 a -849 e da -181 a -175). Il confronto della sequenze degli alleli CSN1S1A, F e N ha messo in evidenza un totale di 25 siti variabili (singole sostituzioni/delezioni nt) delle quali 21 sembrerebbero specifiche dell’allele F e una sola dell’allele N. CONCLUSIONI - I nostri risultati indicano che nessuna delle mutazioni che caratterizzano l’allele F sembrerebbero alterare i siti di regolazione genica, mentre ulteriori indagini si rendono necessarie per valutare il ruolo della mutazione specifica dell’allele N sull’apparente assenza di sintesi proteica ad esso associata.I documenti in IRIS sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
